PARTES EXTERNAS DE LOS APARATOS Y SU FUNCION
ESPECTROFOTOMETRO
1.- botón encendido y calibración al aire (0% T). Nos permite primeramente encender y apagar el aparato, posteriormente, calibrar el aparato al valor de 0%de T.
2.-co la celda partimiento de la muestra. Nos permite colocar la celda (recipiente) que contenga la muestra.
3.- foco del piloto, nos indica que el aparato esta encendido y podemos leer las escalas de absorbancia y transmitancia: la primera logarítmica, de 0 a 2.0,en ella podemos leer el valor de absorbancia que registre el aparato y, en la segunda escala decimal de 0 a 100%, el vlor de transmitancia que registre el aparato.
4.- botón selector de la longitud de onda. Nos permite seleccionar la longitud de onda de trabajo en nm y la izquierda la escala de longitud de onda en nm.
5.- botón de calibración con el blanco o testigo. Nos permite calibrar el aparato al valor de cero A o 100% de T. utilizando el blanco o testigo.
1.- compartimiento de la muestra (simple comperment).
Nos permite colocar la celda (recipiente) que contenga la muestra.
2.- pantalla digital. Lectro óptico (digital readout). En ella podemos leer el valor de la absorbancia, transmitancia, concentración o el factor que registre el aparato.
3.- Tecla MODE o selectora de funciones (Duv mode selector). T (ttransmitancia9, A (absorbancia), C (concentración) y F factor). Nos permite seleccionar la función deseada T, A, C, o F.
4.- Tecla DEC (concentración adjustment controls). De ajuste de concentración para incrementar los valores. Cuando de seleccione la función de concentración para ajustar el valor de concentración de la solución estándar (St). Con esta tecla se puede ir aumentando el valor que se observa en la escala digital.
5.- tecla INC (concentración adjustment controls). De ajuste de concentración para disminuir los valores. Cuando se seleccione la función de concentraciónpara ajustar el valor de la solución estándar (St), con esta tecla se puede ir disminuyendo el valor que se observa en la escala digital.
6. Tecla para imprimir (Print Button). Cuando el aparato está conectado a una computadora o con un registrador de datos, con esta tecla se puede mandar a imprimir los valores obtenidos de las lecturas.
7. interruptor (Lctmp Power Switch). Se utiliza para encender las lámparas de Tungsteno (VIS) y deuterio (UV). Sirve para encender la fuente luminosa que se requiere trabajar.
8. Botón de encendido de la lámpara de deuterio (Deu-terium LampStarter Button). Cuando se requiere utilizar la fuente luminosa de deuterio, después de colocar el interruptor en la posición correspondiente, es necesario oprimir este botón durante unos tres segundos para que la fuente se encienda, si no se oprime este botón aunque el interruptor indique deuterio, la fuente luminosa no se encenderá.
9. Botón de espejos (Mirror Lever) (VIS-UV). Nos permite seleccionar la posición de VIS cuándo se requiere utilizar el aparato en la región visible, y UV, para la región ultravioleta, orientando una serie de espejos que se encuentran en la parte interna del aparato y así reflejar de la fuente luminosa adecuada la energía necesaria y, después de atravesar la muestra problema, reflejar la radiación transmitida hacia el íotodetector correspondiente de acuerdo a la radiación utilizada.
10. Botón de encendido y apagado del aparato (Power Switch) (ON-OFF). Nos permite encender o apagar el aparato.
11, Botón selector de longitud de onda (Wavelength Selection). Nos permite seleccionar la longitud de onda de trabajo en nm y al lado izquierdo inmediatamente la escala de longitud de onda, en ella se lee la longitud de onda en nm, que se va seleccionando mientras se gira el botón selector de longitud de onda.
Botón selector de sensibilidad (Lo-M-Hi) (Sensitivity Switch). Según las necesidades de trabajo nos permite seleccionar una sensibilidad baja. (Lo), media (M) o alta (Hi).
13. Botón de ajuste a O de A y 100% de T (100% T Zero A Control), Nos permite calibrar el aparato al valor de O de A o 100% de T, utilizando el blanco o testigo.
Los espectrofotómetros que trabajan con radiación visible tienen una trayectoria interna que se muestra en forma sintetizada como se observa en la ilustración.
Los espectrofotómetros que trabajan con la radiación. Visible y ultravioleta presentan doble fuente ole radiación (lámparas) y dos foto detectores (fototubos), y están equipados con espejos móviles para poder reflejar la radiación en la dirección, necesaria. En la figura i'08 se muestra cómo es la trayectoria interna en un espectrofo-tótnetro de radiación visible ultravioleta.
3. Saque la celda con el blanco o testigo con que se calibró al valor de cero de A del compartimiento de la muestra y del portaceldas,
4. Intercambie en el portaceldas y en el compartimiento de la muestra las diferentes soluciones estándar y problemas, para ir registrando las lecturas de cada una de estas soluciones.
5. Elabore una tabla de valores que contenga la concentración y lectura de cada una de las soluciones de la serie, la longitud de onda seleccionada y el nombre del compuesto, radical, o ion a determinar.
6. Dibuje en una hoja de papel milimétrico la curva de calibración.
7. Determine la lectura de la solución problema, si este valor no está comprendido entre los límites de la curva de calibración, se hará una dilución.
8. Interpole la lectura de la solución problema en la curva de calibración y determine la concentración de esta solución problema.
9. O bien, podrá utilizar el método directo o el método del factor que más adelante se describirán.
Obtención de lecturas en el SP 21D utilizando la Junción T
1. Calibre el SP 21 D siguiendo los pasos indicados en la técnica de calibración.
2. Presione la tecla MODE para colocar el cursor colocar la posición de transmitancia T.
3. Saque la celda con el blanco o testigo con que se calibró al valor de cien de T del compartimiento de la muestra y del portaceldas.
4. Intercambie en el portaceldas y en el compartimiento de la muestra las diferentes soluciones estándar y problemas para ir registrando las lecturas de cada una de estas soluciones.
5. Elabore una tabla de valores que contenga la concentración y lectura de cada una de las soluciones de la serie, la longitud de onda seleccionada y el nombre del compuesto, radical, o ion a determinar.
6. Dibuje en una hoja de papel semilogarítmico la curva de calibración.
7. Determine la lectura de la solución problema, si este valor no está comprendido entre los límites de la curva de calibración, se hará una dilución.
8. Interpole la lectura de la solución problema en la curva de calibración y determine la concentración de esta solución problema.
Obtención de resultados de concentración en el SP 2 ID utilizando la Junción C
1. Calibre el SP 21D, siguiendo los pasos indicados en la técnica de calibración utilizando A o T.
2. Presione la tecla MODE para colocar el cursor en la posición de concentración C.
3. Saque la celda con el blanco o testigo del compartimiento de la muestra y del porta celdas con que se calibró al valor de cero de A o 100% de T e introduzca en el portaceldas y en el compartimiento de la muestra por la solución estándar.
4. Presione las teclas DEC o INC hasta que en la escala digital aparezca el valor representativo de la concentración de la solución estándar.
5. Intercambie en el porta celdas y en el compartimiento de la muestra las diferentes soluciones problema para ir registrando las lecturas de concentración en forma directa de la escala digital con sus unidades correspondientes (las unidades serán las mismas que se están manejando para el estándar).
Aplicaciones de la SP VIS-UV
La espectrofotometría VIS-UV tiene una gran aplicación en las determinaciones cuantitativas en muchas áreas, las cuales, en su mayoría, en la actualidad están autorizadas por NOM (Norma Oficial Mexicana) y se publican
Ejemplos de las aplicaciones y determinaciones espectrofotométricas
• Determinaciones en los análisis clínicos en sangre
(mg/dl):
Glucosa
- Urea
- Creatinina
- Ácido úrico
- Colesterol
- Proteínas
- Bilirrubinas
- Hemoglobina
- Fosfatasa alcalina y acida
- Fósforo
- Calcio
- Albúmina
* En análisis de aguas potables y residuales:
tabla 15
Normas para el análisis de aguas potables y residuales
NOM
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Aplicación
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NMX-AA39
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Determinación de sustancias activas al azul de metileno en aguas residuales (detergentes).
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NMX-AA-44-1977
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Determinación de cromo hexavalente en agua.
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NMX-AA-50
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Determinación de fenoles en agua.
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NMX-AA-51
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Determinación de metales en el análisis de aguas.
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MMX-AA-58
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Determinación de cianuros en el análisis de aguas.
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NMX-AA-77
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Determinación de fluoruros en el análisis de aguas.
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NMX-AA-78
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Determinación de zinc en el análisis de aguas.
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NOM-AA-84-1982
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Determinación de sulfates en agua residuo y potable.
Determinación de fosfatos en agua residuo
Se puede determinar la estructura de una sustancia por medio del espectro de adsorción en UV e infrarrojo.
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• En el área microbiológica y bioquímica:
En el control de cinética enzimática (por ejemplo: como las siguientes enzimas: sacarosa, invertasa, fructofurnosidasa, etc.), determina los cambios por efecto de concentración de enzima, efecto por la concentración de sustrato, efecto causado por cambios de temperatura, efecto causado por los cambios de pH.
aj Determinación de fósforo en DNA.
b) Determinación del contenido de RNA (en el área de fermentaciones).
c) Determinación de digestibilidad in uitro (en el área de fermentaciones).
d) Determinación de concentración de alcoholes superiores (en el área de fermentaciones).
• En el área de análisis de alimentos:
a) Determinación de nitrógeno proteico.
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